A Peste Suína Africana (PSA) é uma doença viral altamente contagiosa que se manifesta de forma diferente em suínos selvagens e domésticos. A PSA ocorre em todo o mundo, incluindo Europa, América do Sul e Ásia. Seu impacto depende da virulência do vírus, da dose infecciosa e da via de infecção.
Cepas vivas atenuadas PSA
A maioria dos isolados PSA são 100% letais em suínos. Algumas são cepas de baixa virulência com taxas de mortalidade mais baixas, e outras são cepas completamente atenuadas que não causam sintomas clínicos.
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As cepas vivas atenuadas PSA geralmente aparecem algum tempo após a invasão de cepas virulentas. Isso leva à coexistência e adaptação de longo prazo do PSA e seu hospedeiro. Essas cepas diminuíram a virulência em suínos domésticos. Isso incentiva seu uso como possíveis candidatos a vacinas.
Portanto, a variação da sequência genética de cepas vivas atenuadas da PSA fornece referência para a prevenção e controle científico da PSA e para o desenvolvimento de novas vacinas.
Virulência PSA
A infecção por PSA produz uma ampla gama de formas clínicas: superaguda, aguda, subaguda e crônica em suínos domésticos.
A infecção aguda de suínos causa anorexia, febre, hemorragias nasais, eritema, cianose da pele, fezes negras e, em alguns casos, diarreia. Até 100% de mortalidade ocorre 12 a 14 dias após a infecção.
Cepas moderadamente virulentas de PSA causam doença subaguda levando a sinais clínicos e lesões mais leves. A morte ocorre 15 a 20 dias após a infecção. Vários genes estão relacionados com a virulência de isolados PSA. Estes estão localizados adjacentes uns aos outros na região variável direita do genoma PSA.
A deleção dos genes UK e 23-NL do PSA patogênico diminui significativamente a virulência do PSA em suínos. Além disso, a deleção de genes da família multigênica no PSA reduz a capacidade do vírus de se replicar em macrófagos suínos ou em carrapatos e atenua completamente a virulência normalmente forte.
As cepas vivas atenuadas de PSA são obtidas usando vários métodos, incluindo:
Isolar cepas de vírus naturalmente atenuadas de suínos infectados no campo;
Passagem de cepas virulentas em cultura celular primária ou em cultura celular contínua; e
Manipulação genética de isolados de campo altamente virulentos.
Isolados de campo de baixa virulência
Cepas de vírus naturalmente atenuadas são isoladas principalmente de porcos infectados no campo. Existem pelo menos 6 cepas de PSA atenuadas em campo bem conhecidas.
A estirpe NH/P68 isolada de porcos cronicamente infectados com PSA no centro de Portugal em 1968. Induz a produção de anticorpos específicos pelo hospedeiro e protege o hospedeiro da exposição ao desafio pela estirpe virulenta Lisbon 60.
A cepa OURT 88/3 foi isolada de Ornithodoros erraticus em uma fazenda em Portugal em 1988.
A cepa Estonia 2014 foi isolada de javalis no nordeste da Estônia em 2014.
A cepa HuB20 foi isolada de tecido muscular suíno com osso.
A cepa Pig/Heilongjiang/HRB1/2020 foi isolada do baço de porcos na China.
A cepa Lv17/WB/Rie1 (isolado de campo atenuado derivado da Geórgia) pertencente ao genótipo II do PSA foi isolada na Letônia.
As estirpes de vírus vivos atenuados protegem eficazmente contra o desafio com vírus virulentos homólogos. Na década de 1960, um isolado de campo naturalmente atenuado de PSA pertencente ao genótipo I foi utilizado para desenvolver uma vacina em Portugal. No entanto, esta abordagem resultou em virulência residual em uma alta proporção de porcos imunizados, que desenvolveram lesões crônicas de PSA.
Outro método para obter cepas vivas atenuadas de PSA é o processo de adaptação no qual os isolados virulentos se replicam em uma variedade de culturas primárias de células suínas ou linhagens celulares estabelecidas para perder sua virulência. As cepas PSA atenuadas obtidas por passagem seriada não são apenas candidatas à pesquisa de vacinas PSA. Eles também são úteis no estudo das características genéticas moleculares e do mecanismo patogênico do vírus.
A atenuação do PSA pode ser realizada por passagem em cultura celular primária ou em cultura celular contínua. No entanto, a abordagem de passagem serial diminui gradualmente a virulência e a imunogenicidade do vírus. Isso, por sua vez, dificulta a produção de proteção contra o desafio subsequente pelo vírus homólogo.
Além disso, as tentativas de atenuar o PSA por passagem adicional em células cultivadas estão associadas a uma expressão alterada ou mesmo à deleção completa de genes que codificam certa virulência ou fatores de evasão associados ao sistema imunológico. Isso pode resultar em cepas que perderam completamente a patogenicidade para suínos.
A União Europeia financiou um projeto da UE chamado “Vacdiva”, com o objetivo de desenvolver uma vacina eficaz contra a PSA nos próximos 4 anos.
Dados preliminares indicam que algumas linhagens contínuas de células suínas podem ser alternativas realistas aos macrófagos primários para pesquisa e para a produção em larga escala de uma vacina contra PSA.
A maioria dos isolados PSA são 100% letais em suínos. Algumas são cepas de baixa virulência com taxas de mortalidade mais baixas, e outras são cepas completamente atenuadas que não causam sintomas clínicos.
As cepas vivas atenuadas PSA geralmente aparecem algum tempo após a invasão de cepas virulentas. Isso leva à coexistência e adaptação de longo prazo do PSA e seu hospedeiro. Essas cepas diminuíram a virulência em suínos domésticos. Isso incentiva seu uso como possíveis candidatos a vacinas.
Portanto, a variação da sequência gênica de cepas vivas atenuadas da PSA fornece referência para a prevenção e controle científico da PSA e para o desenvolvimento de novas vacinas.
Vírus com deleções geneticamente modificadas
A manipulação genética de isolados de campo altamente virulentos é outra abordagem para criar cepas atenuadas de PSA. Nesta abordagem, os genes virulentos são removidos do genoma do vírus para obter a atenuação. No entanto, a identificação dos genes deletados específicos que causam atenuação ainda é desconhecida.
De acordo com os estudos de pesquisa, os vírus PSA atenuados com deleção de gene ainda são os candidatos a vacina mais eficazes para prevenir a PSA. No entanto, é crucial escolher um gene alvo, considerar a segurança da imunização e a adequação da proteção e alcançar um equilíbrio entre segurança e eficácia.
Nesse contexto, o trabalho dos cientistas do Serviço de Pesquisa Agrícola (ARS) do USDA é bem conhecido. Eles desenvolveram uma vacina candidata chamada ASFV-G-ΔI177L na qual deletaram 6 genes. Pode ser produzido comercialmente, mantendo a eficácia da vacina contra cepas asiáticas PSA quando testado em raças suínas europeias e asiáticas.
Os pesquisadores relataram que a deleção do gene PSA específico do vírus A137R do isolado altamente virulento PSAv-Georgia2010 (PSAv-G) induz uma atenuação significativa da virulência do vírus em suínos. Uma vacina baseada nessa abordagem está sendo lançada no Vietnã.
Pesquisas
Mais pesquisas são necessárias para avaliar os aspectos críticos das vacinas candidatas, como início e duração da imunidade, estabilidade genética, estabilidade de atenuação, doses mínimas de proteção e possíveis vias de inoculação. Além disso, é necessária a padronização de metodologias para testar a eficácia de vacinas candidatas, doses de vacina, via de inoculação e dose de desafio.
Recomenda-se avaliar as bases do efeito diferencial na virulência do vírus de deletar os mesmos genes entre vários isolados de vírus. A descoberta e caracterização de genes associados à virulência e sua interação com o hospedeiro ainda não estão claros.
Portanto, é necessário realizar uma análise mais aprofundada do genótipo PSAv por meio de sequenciamento de todo o genoma de alta qualidade para melhorar nossa compreensão do rastreamento epidemiológico desta doença, incluindo a relação evolutiva e as diferenças fenotípicas entre diferentes cepas PSA e os fatores indutores relacionados à variação genômica.
Observações finais
As vacinas vivas atenuadas contra a PSA podem induzir vários níveis de proteção, variando de 60% a 100% contra o desafio com vírus virulentos, mas têm o potencial de causar reações pós vacinação e efeitos colaterais adversos.
A vantagem da imunização com vírus vivos atenuados em vez de antígenos selecionados é a indução de respostas imunes contra todos os antígenos virais que são normalmente encontrados pelo hospedeiro durante uma infecção; portanto, é mais eficaz.
Esta abordagem parece ser a mais promissora de todas as estratégias, mas mais estudos são necessários para desenvolver vacinas vivas atenuadas contra a PSA e para enfrentar os principais desafios e preocupações de segurança.
